ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
Вестник РГМУ
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Два HMG-домена митохондриального белка дрожжей Abf2p обладают различным сродством к ДНК
Информация об авторах
1 Кафедра молекулярной биологии, биологический факультет,Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва
2 Кафедра общей хирургии, факультет фундаментальной медицины,Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва
Для корреспонденции: Каменский Петр Андреевич
Ленинские горы, д. 1, стр. 12, г. Москва, 119899; moc.liamg@iksnemak.rtoip
Информация о статье
Финансирование: работа выполнена при поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 14-04-31554 мол_а).
Статья получена: 29.09.2015
Статья принята к печати: 09.12.2015
Опубликовано online: 05.01.2017
|
Рис. 1. Выделение и очистка рекомбинантных белков, соответствующих доменам HMG1 и HMG2 белка Abf2p
Очистку рекомбинантных белков проводили методом металл-аффинной хроматографии на никель-сефарозе. 1 — маркеры молекулярных масс (слева приведены молекулярные массы маркерных белков); 2, 6 — лизаты разрушенных клеток; 3, 7 — фракции, не связавшиеся с аффинной колон- кой; 4, 8 — очищенные препараты рекомбинантных белков HMG1 и HMG2 соответственно.
Рис. 2. Анализ связывания рекомбинантных белков, соответствующих доменам HMG1 и HMG2, с ДНК методом задержки в геле
Линейный ДНК-дуплекс (double-stranded DNA — dsDNA) и крестообразную ДНК (4-way junction — 4wj) в концентрации 10 нМ инкубировали с возрастающими концентрациями рекомбинантных белков, после чего реакционные смеси разделяли в 6 % полиакриламидном геле. (А) Связывание с ДНК домена HMG1; 1–4 — взаимодействие с ДНК-дуплексом, 5–9 — связывание с крестообразной ДНК; C1 — образующийся комплекс. (Б) Связывание с ДНК домена HMG2; 1–3 — взаимодействие с ДНК-дуплексом, 4–6 — связывание с крестообразной ДНК. В нижней части рисунка приведены использованные концентрации рекомбинантных белков, нМ.
