Рис. 1. Лентивирусная трансдукция клеток. (А) Изменение доли флуоресцирующих клеток HEK293 при проведении трансфекции; (Б) Изменение доли флуоресцирующих клеток HaCaT при проведении трансдукции; (В) Изменение числа клеток в образцах при отборе клеток, устойчивых к пуромицину. ТРД — трансдуцированные клетки; НТР — нетрансдуцированные клетки (отрицательный контроль). Трансдукцию и трансфекцию клеток проводили так, как описано в разделе «Материалы и методы»

Рис. 2. Влияние экспрессии миРНК на морфологические характеристики трансдуцированных клеток. (А) Клетки, экспрессирующие контрольную shРНК. (Б) Клетки, экспрессирующие shРНК, специфичную к интерстициальной коллагеназе. Трансдукцию клеток HaCaTпроводили так, как описано в разделе «Материалы и методы»

Рис. 3. Оценка изменений генной экспрессии в трансдуцированных эпи- дермальных кератиноцитах человека методом количественной ПЦР. (А) Изменения в экспрессии матриксных металлопротеиназ. (Б) и (В) Изменения в экспрессии генов с повышенной и пониженной экспрессией соответственно. (Г) Экспрессия генов «домашнего хозяйства». Данные измерений нормировали по уровню экспрессии гена ACTB. На рисунке показаны результаты сравнения генной экспрессии в эпидермальных кератиноцитах, экспрессирующих shРНК, специфичную к интерстициальной коллагеназе и контрольную shРНК (см. раздел «Материалы и Методы»)

Рис. 4. Влияние экспрессии shРНК, специфичной к интерстициальной коллагеназе (ИК), на пролиферацию и миграцию трансдуцированных клеток. Анализ кривых роста (А) и количественная оценка скорости миграции (Б) клеток HaCaT, экспрессирующих shРНК, специфичную к ИК и контрольную shРНК. (В) Миграция трансдуцированных клеток: состояние культур на следующий день после начала эксперимента и по его окончании. Детали экспериментальных процедур описаны в разделе «Материалы и методы»

Рис. 5. Оценка ферментативной активности интерстициальной коллагеназы (ИК) в трансдуцированных эпидермальных кератиноцитах клеточном гомогенате и культуральной среде. (А) Зимография образцов питательной среды, собранных при культивировании трансдуцированных клеток: 1 — клетки, экспрессировавшие контрольную shРНК; 2 — клетки, экспрессировавшие shРНК, специфичную к ИК. Стрелками указано месторасположение матриксных металлопротеиназ в геле. (Б) Зимография образцов клеточного гомогената, собранных при культивировании трансдуцированных клеток: 1 — клетки, экспрессировавшие контрольную shРНК; 2 — клетки, экспрессировавшие shРНК, специфичную к ИК. (В) Количественная оценка ферментативной активности. Время культивирования клеток до начала сбора образцов — 48 ч. Конфлюэнтность клеток на момент сбора образцов — 60 %. Культивирование клеток, получение гомогената, а также проведение белкового электрофореза и зимографии описаны в разделе «Материалы и методы»