ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
Вестник РГМУ
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
МЕТОД
Протокол разработки скрининговой тест-системы для оценки иммунологической памяти к вакциноуправляемым инфекциям: одновременное определение титра антител к кори, паротиту, краснухе и гепатиту В
Информация об авторах
1 Лаборатория трансляционной биомедицины,Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н. Ф. Гамалеи, Москва
2 Институт молекулярной медицины,Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова (Сеченовский университет), Москва
3 Кафедра вирусологии, биологический факультет,Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва
Для корреспонденции: Мазунина Елена Петровна
ул. Гамалеи, д. 18, г. Москва, 123098; ur.relbmar@aneleanidlan
Информация о статье
Финансирование: работа поддержана государственным заданием Министерства здравоохранения РФ.
Вклад авторов в работу: Е. П. Мазунина, Д. А. Клейменов — анализ литературы, планирование исследования, сбор, анализ и интерпретация данных, подготовка черновика рукописи, подготовка финальной версии рукописи; В. А. Мануйлов — анализ литературы, планирование исследования, подготовка черновика рукописи; В. А. Гущин — анализ литературы, планирование исследования, анализ и интерпретация данных, подготовка черновика рукописи, подготовка финальной версии рукописи; А. П. Ткачук — анализ литературы, планирование исследования, критический анализ рукописи.
Статья получена: 26.09.2017
Статья принята к печати: 10.10.2017
Опубликовано online: 13.01.2018
|
Рис. 1. Общая схема метода непрямого серологического мультиплексного иммунного анализа. Показаны микросферы четырех регионов, каждая из которых сенсибилизирована определенным антигеном. Добавление сыворотки к микросферам и первая инкубация (А). Первая серия отмывок — удаление несвязавшихся компонентов сыворотки (Б). Добавление к микросферам с иммунными комплексами антивидовых антител (В), конъюгированных с флюорохромной меткой — фикоэритрином и вторая инкубация. Вторая серия отмывок — удаление несвязавшихся компонентов (конъюгата) (Г). Микросферы с иммунокомплексами отправляются для анализа в мультиплексный анализатор MAGPIX (Д)
Рис. 2. Общая схема разработки мультиплексной тест-системы
Рис. 3. Результаты определения антител IgG к вирусу краснухи в сыворотках крови человека методами xMAP и ИФА
Рис. 4. Результаты определения антител IgG к вирусу кори в сыворотках крови человека методами xMAP и ИФА
Рис. 5. Результаты определения антител IgG к вирусу эпидемического паротита в сыворотках крови человека методами xMAP и ИФА
Рис. 6. Кривые разведения пулов сывороток с высоким содержанием антител к вирусам краснухи (RUB), кори (MEA), эпидемического паротита (MUM) и гепатита В (HB)
Рис. 7. Схема-дизайн постановки для валидации разработанной тест-системы. С1–8 — лунки для анализа стандартов-калибраторов и построения калиб- ровочной кривой, Б — лунки для анализа стандартного дилюента, О+Б (образец+буфер) — образцы с аналитом в серии разведений со стандартным дилюентом, О+М (образец+матрикс) — образцы с аналитом в серии разведений с исходным матриксом образца (например, кроличьей сывороткой или сывороткой человека, лишенной антител)
Таблица 1. Антигены-кандидаты для включения в тест-систему
Таблица 2. Стандарты и контрольные сыворотки, использованные при создании тест-системы
Таблица 3. Некоторые оптимальные условия проведения анализа с помощью создаваемой тест-системы
