ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Регистрация динамики соотношения НАД+/НАДН в тканях эмбрионов рыб Danio rerio с помощью генетически кодируемого биосенсора

Информация об авторах

1 Лаборатория молекулярных технологий,
Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва

2 Отдел нейро-компьютерных интерфейсов, НИИ трансляционной медицины,
Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва

3 Кафедра биохимии, биологический факультет,
Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва

Для корреспонденции: Белоусов Всеволод Вадимович
ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10, г. Москва, 117997; ur.hcbi@vosuoleb

Информация о статье

Финансирование: работа выполнена при поддержке гранта Российского фонда фундаментальных исследований мол_а_дк № 16-34-60175 и гранта Президента РФ № МК-6339.2016.4, а также с использованием оборудования ЦКП ИБХ, поддержанного Минобрнауки России, идентификатор соглашения RFMEFI62117X0018.

Статья получена: 05.12.2017 Статья принята к печати: 25.12.2017 Опубликовано online: 14.03.2018
|
Рис. 1. Спектр возбуждения флуоресценции белкового препарата биосен- сора SoNar. Для спектра возбуждения флуоресценции характерно наличие двух пиков с максимумами 420 и 490 нм. При добавлении к белку НАДН в его спектре происходит увеличение интенсивности в области 420 нм и, наоборот, уменьшение в области 490 нм. В присутствии НАД+ возрастает интенсивность в области 490 нм. Для биосенсора SoNar характерно нали- чие одного пика эмиссии флуоресценции с максимумом в области 518 нм
Рис. 2. Динамика изменения соотношения НАД+/НАДН и рН в тканях однодневных эмбрионов D. rerio до и после инъекции в желточный мешок растворов пирувата и лактата. (А и Г) Фотографии фрагментов тела малька D. rerio до и после инъекции 1 нл 200 мМ раствора лактата (А) и пирувата (Г). Фотографии раскрашены в псевдоцвета, которые соответствуют значению сигнала биосенсора SoNar (F420/F490). Области 1 и 2, отмеченные белым кругом на первой фотографии, обозначают участки на теле малька, в пределах которых регистрировалось изменение F420/F490. На других рыбах выбирали аналогичные области. (Б и Д) Динамика изменения соотношения НАД+/НАДН, регистрируемая с помощью биосенсора SoNar, в желточном мешке (красная линия) и теле (черная линия) малька D. rerio до и после инъекции растворов лактата (Б) и пирувата (Д). (В и Е) Динамика изменения рН, регистрируемая с помощью биосенсора SypHer2, в желточном мешке (красная линия) и теле (черная линия) малька D. rerio до и после инъекции растворов лактата (В) и пирувата (Е). На всех графиках (Б, В, Д, Е) планки погрешностей соответствуют стандартному отклонению среднего значения. График (Б) построен по результатам, полученным на 10 животных; график (Д) построен по результатам, полученным на 11 животных; графики (В) и (Е) построены по результатам, полученным на 6 животных для каждого