DOI: 10.24075/vrgmu.2018.009

ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Распространенность вульгарного ихтиоза и частота мутаций R501x И 2282del4 в гене FGL в Ростовской области

С. С. Амелина1, Е. В. Дегтерева1, Н. В. Петрова2, А. В. Марахонов3, В. Е. Темников1, Н. Е. Петрина, М. А. Амелина 4, Н. В. Ветрова5, Т. И. Пономарёва1, Р. А. Зинченко6
Информация об авторах

1 Ростовский государственный медицинский университет, Ростов-на-Дону

2 Медико-генетический научный центр, Москва

3 Московский физико-технический институт (государственный университет), Долгопрудный

4 Академия биологии и биотехнологии им. Д. И. Ивановского, Южный Федеральныйо Университет, Ростов-на-Дону

5 Центр генетики и репродуктивной медицины «Генетико», Москва

6 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва

Для корреспонденции: Зинченко Рена Абульфазовна
ул. Москворечье, д. 1, г. Москва, 115478; ur.liam@oknehcnizaner

Информация о статье

Финансирование: исследование выполнено при частичной финансовой поддержке гранта РНФ 17-15-01051.

Статья получена: 17.11.2017 Статья принята к печати: 10.02.2018
|

Вульгарный ихтиоз (OMIM #146700, ichthyosis simplex) является наиболее частой и относительно мягкой формой из всей группы наследственных несиндромальных ихтиозов. Клинические симптомы вульгарного ихтиоза (ВИ) обычно появляются на втором месяце жизни и включают сухость кожи, мелкопластинчатое и/или отрубевидное шелушение светло-серого цвета, наиболее выраженное на животе, груди и разгибательных поверхностях конечностей, фолликулярный кератоз и гиперлинейность кожи ладоней и стоп [1, 2].

В группе несиндромальных форм ихтиозов ВИ является наиболее частой формой. Заболевание обусловлено наличием мутаций в гене филаггрина (OMIM *135940, filaggrin (FLG)). Ген FLG локализуется в кластере генов комплекса эпидермальной дифференцировки на коротком плече 1-й хромосомы (1q21) и состоит из трех экзонов и двух интронов, за синтез белка отвечает третий экзон [2].

Классическое исследование, проведенное в Англии, показало, что частота всех форм ихтиоза составила 1:3 665, вульгарного ихтиоза — 1:5 300, Х-сцепленного — 1:6 190 (мужского населения), аутосомно-рецессивных форм ихтиоза — 1:300 000. Вместе с тем авторы отмечают, что фактическая частота значительно выше, так как выявлено 24 больных аутосомно-доминантным ихтиозом из 6 051 школьников и частота соответственно 1:250 [3].

Проведенные в разных регионах Европы ДНК-исследования по изучению мутаций у больных ВИ показали, что частыми в гене FLG являются мутации R510X и 2282del4, частота которых у больных ВИ варьируют по данным разных авторов от 30,0 % до 67,3 % [4]. В исследовании Smith F.J.D. (2006) показано незначительное колебание частот мутаций R501X и 2282del4 в гене FLG в ирландских (4,1 % и 0,5 % соответственно), шотландских (2,1 % и 1,2 %) и американских популяциях (2,4 % и 1,1 %) [5]. В то же время Palmer C.N. (2006) при обследовании шотландских школьников сообщил о более высоких частотах мутаций R501X и 2282del4 (2,9 % и 1,9 % соответственно) [6]. Gruber R. (2007) показал, что в западной Австрии частоты для каждой мутации составили 1,4 % [7]. Возможно выявленные различия обусловлены различными подходами к выявлению и обследованию пациентов.

В Юго-восточной Азии молекулярно-генетическое обследование больных ВИ позволили описать новые мутации 3321delA, S2554X, 441delA, 1249insG, 7945delA, Q2147X, E2422X и R4307X в гене FLG. Частота мутации 3321delA в гене FLG составила 52,31 % у больных ВИ и 4% — в контрольной группе здоровых индивидов. Мутации, описанные в европейских популяциях, в Азии встречаются редко [8].

В России частота мутации 2282del4 в гене FLG в популяционной выборке Новосибирска составила 3,8 % [9], в Республике Башкортостан гетерозиготными носителями мутации 2282del4 являлись 3,86 % контрольной группы индивидов [10]. На Украине частота мутаций R510X и 2282del4 составила 2,1 % и 1,0 % соответственно [11].

В настоящее время принято считать, что вульгарный ихтиоз является заболеванием с неполным доминированием [1, 5]. В исследовании Smith F.J.D. (2006) показано, что пациенты имели мягкие проявления вульгарного ихтиоза при гетерозиготном носительстве одной из мутаций в гене FLG, в то время как гомозиготные носители R501X и компаунд гетерозиготные носители R501X/2282del4 имели более тяжелый фенотип [5]. Рядом авторов отмечено, что наличие мутаций в ген FLG носит доза-зависимый эффект [6].

Целью настоящего исследвоания явилась оценка распространенности вульгарного ихтиоза и частоты мутаций R501X и 2282del4 в гене FLG у населения Ростовской области (РО).

ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ

Проведено медико-генетическое обследование населения 12 районов РО (Волгодонского, Дубовского, Егорлыкского, Зимовниковского, Красносулинского, Матвеево-Курганского, Миллеровского, Мясниковского, Родионово-Несветайского, Тарасовского, Целинского, Цимлянского), суммарной численностью около 500 тыс. человек [12]. Обследование население проведено по протоколу генетико-эпидемиологических исследований, разработанному и применяемому более 30 лет в РФ [13, 14].

Расчет распространенности ВИ проведен исходя из соотношения численности обследованного населения к числу больных. При проведении сравнительного анализа распространенности ВИ использованы данные генетико-эпидемиологических исследований ФГБНУ «МГНЦ» [13, 14], что обусловлено несопоставимостью данных литературы о распространенности ВИ в различных регионах вследствие существенных различий в методах получения материала.

Накопление ВИ в обследованных районах РО определено с использованием F-распределения (уровень значимости α<0,001) [15].

Молекулярно-генетическое исследование по выявлению мутаций R501X и 2282del4 в гене филаггрина FLG выполнено в лаборатории генетической эпидемиологии ФГБНУ «МГНЦ».

С целью определения частоты мутаций 2282del4 в гене FLG обследовано две группы. Первая группа — больные с ВИ (58), выявленные при проведении генетико-эпидемиологического исследования в 12 районах РО. Вторая группа представлена 127 здоровыми неродственными индивидами, не менее 3-х поколений, проживающих на территории РО: Миллеровского района (71 человек) и Волгодонского (56). При обследовании, все пациенты подписали письменное информированное согласие (в случае несовершеннолетних детей информированное согласие получено у их родителей): на добровольное участие в исследовании, на осмотр, забор биологического материала (кровь), публикацию в печати. Исследование одобрено этическим комитетом ФГБНУ «МГНЦ».

Выделение геномной ДНК, из лейкоцитов периферической крови пациентов, выполнено с использованием набора реактивов для выделения ДНК DNAPrep100 (DIAtom) в соответствии с протоколом производителя. Для анализа мутаций (с.2282del4 и p.ARG501X) в гене FLG использован метод полимеразной цепной реакции с последующим анализом полиморфизма длин рестрикционных фрагментов. Сравнительный анализ частот мутаций среди больных и здоровых индивидов проведен при помощи критерия Фишера [15].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведения генетико-эпидемиологического исследования в 12 районах РО выявлено 99 больных с вульгарным ихтиозом из 49 семей.

Проведен расчет показателей распространенности ВИ для каждого района и по области в целом (табл. 1). Анализ показал, что наибольшее число больных ВИ зарегистрировано в Миллеровском (37) и в Целинском (20) районах, в то время как в Тарасовском, Родионово-Несветайском и Красносулинском районах больных не выявлено.

Максимальные значения распространенности ВИ получены в Целинском (1:1942) и Миллеровском (1:2032) районах. Значения распространенности ВИ в обследованных регионах Европейской части России приведены в табл. 2.

Как видно из представленных данных, показатель распространенности в РО соответствует среднему значению по России 1:5151. Наименьшие значения распространенности выявлены в Брянской области 1:88 210, наибольшая распространенность отмечена в Республике Марий Эл, которая составила 1:2130 [13, 14]. В Миллеровском и Целинском районах выявлено достоверное накопления ВИ (уровень значимости α<0,001), показатели F-распределения составили 2,44 и 2,56, соответственно.

При проведении клинико-эпидемиологического анализа отмечен выраженный полиморфизм клинических проявлений (от легких форм до тяжелых) не только между различными семьями, но и внутрисемейный. Дебют заболевания у всех пациентов с рождения. Кожные покровы и слизистые сухие, «исчерченность» кожи ладоней и стоп, сухость волос. Отмечено шелушение кожи от редких поражений мелкопластинчатого светло-серого цвета до крупнопластинчатых больше на животе и голенях. У части пациентов шелушение наиболее выражено на груди и разгибательных поверхностях конечностей, отмечен фолликулярный кератоз, чешуйки распространялись также по краю роста волос, по краю губ с красной каймой.

При анализе мест рождения и происхождения пациентов с ихтиозом, выявленных в Ростовской области отмечено, что около половины всех больных проживают либо родом из Миллеровского района (37 больных из 16 семей). По национальности все больные — русские, по происхождению — коренные жители района (коренными считали жителей и их семьи, проживающие на территории области не менее трех поколений). Истинное число больных ВИ в выявленных семьях составило 50 (4 — умерло, 7 — проживают за пределами района), то есть прослеживается эффект основателя. Генеалогический анализ позволил установить родственные связи для части семей, так 5 из 16 семей (16 больных) родом (в третьем—четвертом поколении) из хутора Грай-Воронец и происходят от одного предка, родившегося в конце XIX века (1896 г.). Родословная этих семей представлена на рисунок.

Из общего числа обследованных больных с ВИ 58 больных из 38 семей согласились принять участие в подтверждающей ДНК-диагностике. При обследовании у 28 больных из подтверждено наличие мутации 2282del4 в гене FLG в гетерозиготном состоянии, что составило 48,28 % обследованных неродственных пациентов, мутация R501X не выявлена.

При обследовании популяционной группы здоровых индивидов у двух человек обнаружена мутация 2282del4 в гене FLG в гетерозиготном состоянии, что составило 1,58 %, мутация R501X также не выявлена.

Проведенное молекулярно-генетическое исследование позволило рассчитать частоту мутации 2282del4 в гене FLG у больных ВИ, доверительный интервал которой составил 0,36892<0,48276<0,59797; а также частоту в популяции с доверительным интервалом 0,00281<0,01575<0,04874, различия p=99,9 %. Необходимо отметить, что мутации выявлены у здоровых индивидов, проживающих в Миллеровском районе.

Полученные значения частоты мутации ниже, чем в Европе, но соответствуют результатам, полученным в Новосибирске [7, 9].

ВЫВОДЫ

Оценена распространенность ВИ в РО, которая составила 1:5025 обследованных, с вариацией по районам от 0 (в Тарасовском, Родионово-Несветайском и Красносулинском) до 1:1942 в Целинском и в 1:2032 Миллеровском районах. Показатель распространенности ВИ в РО соответствует среднему значению по России 1:5151 [13, 14]. Анализ происхождения пациентов показал, что для большей части семей в РО прослеживается эффект родоначальника. Анализ частот мутаций R501X и 2282del4 в гене FLG, оцененной среди пациентов с ВИ, выявил, что частота мутации 2282del4 составила 48,28 %, в то время как мутация R501X не была выявлена. Частота мутации 2282del4 в гене FLG среди 127 здоровых неродственных индивидов РО оказалась достоверно ниже и составила 1,58 %, что косвенно подтверждает патогенное действие мутации в группе больных.

КОММЕНТАРИИ (0)