DOI: 10.24075/vrgmu.2018.021

ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Cas13a: получение и использование для определения вирусной РНК

А. С. Савинова1,2, Е. Ю. Коптев1, Е. В. Усачев1, А. П. Ткачук1, В. А. Гущин1,3
Информация об авторах

1 Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи, Москва

2 Лаборатория трансляционной биомедицины,
Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи, Москва

3 Кафедра вирусологии, биологический факультет,
Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва

Для корреспонденции: Владимир Алексеевич Гущин
ул. Гамалеи, д. 18, г. Москва, 123098; 89037515786; moc.liamg@adainawow; gro.ayelamag@nihchsug.a.rimidalv

Статья получена: 31.05.2018 Статья принята к печати: 07.06.2018
|

Использование CRISPR-Cas систем для редактирования геномов организмов в последнее время стало одним из магистральных научных направлений. Между тем белки системы CAS можно применять для разработки методов молекулярной диагностики. Традиционные подходы к идентификации микроорганизмов имеют ряд недостатков: они времязатратны (культуральные методы диагностики), недостаточно чувствительны (иммунологические методы), имеют высокую себестоимость и методически сложны (ПЦР, секвенирование). Целью работы было получение функционально активного препарата белка Cas13а и изучение его поведения в различных условиях, в том числе при изменении концентрации мишени, для дальнейшего использования в диагностических целях. Была создана генетическая экспрессионная конструкция, имеющая на 5'-конце T7-промотер и ген сas13a бактерии Leptotrichia wadei. Получены препараты функционально активной программируемой РНКазы белка Cas13a, направляющей РНК, а также РНК вируса гриппа Б (РНК-мишень). Функциональную активность РНКазы белка Cas13a определяли по появлению флуоресцентного сигнала в реакционной смеси, содержащей направляющую РНК, РНК-мишень, молекулярный РНК-маячок. Показано, что полученный препарат белка Cas13a способен специфически выявлять мишень на примере фрагментов РНК вируса гриппа Б и не обладает неспецифическими видами РНКазной активности. Данное исследование может стать основой для создания нового быстрого специфичного и чувствительного метода идентификации микроорганизмов.

КОММЕНТАРИИ (0)