DOI: 10.24075/vrgmu.2018.052

ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Эффективность создания делеции CCR5Ddelta32 методом CRISPR-Cas9 в эмбрионах человека

Т. А. Кодылева1, А. О. Кириллова1, Е. А. Тыщик1, В. В. Макаров2, А. В. Хромов2, В. А. Гущин2, А. Н. Абубакиров1, Д. В. Ребриков1,3, Г. Т. Сухих1
Информация об авторах

1 Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени В. И. Кулакова, Москва

2 Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова, Москва

3 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва

Для корреспонденции: Ребриков Денис Владимирович
ул. Островитянова, д. 1, г. Москва, 117997; moc.liamg@vokirberd

Статья получена: 26.09.2018 Статья принята к печати: 09.10.2018
|

Изменение гена CCR5 путем редактирования генома CD4+-T-клеток является одним из способов предотвращения распространения ВИЧ-1-инфекции. Однако похожая стратегия защиты от ВИЧ может быть использована и для защиты плода ВИЧ-инфицированных женщин со слабым ответом на антиретровирусную терапию. Создание «естественного» аллеля CCR5delta32 на стадии зиготы может защитить плод от ВИЧ-инфекции во время внутриутробного развития и родов. Целью данного исследования была оптимизация системы CRISPR-Cas9 под создание гомозиготной 32-нуклеотидной делеции (аналогичной природному варианту CCR5delta32) в S-фазе зиготы человека. Для редактирования генома были использованы зиготы с аномальным числом пронуклеусов (более двух), непригодные для ЭКО. 16 аномальных зигот от доноров с WT CCR5 были инъецированы разработанной системой CRISPR-Cas9 в S-фазе. После инъекции зиготы помещали в культуральную среду Blastocyst (COOK) и культивировали в течение 5 дней в CO2-инкубаторе до стадии бластоцисты (приблизительно 250 клеток). Для анализа эффективности редактирования генома 8 успешно развивавшихся эмбрионов были генотипированы методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Из 16 зигот, инъецированных системой CRISPR-Cas9, лишь 8 достигли стадии бластоцисты. ПЦР-генотипирование показало отсутствие исходного варианта WT CCR5 в 5 из 8 бластоцист (100% гомозиготы по CCR5delta32). Два эмбриона продемонстрировали около 3% и один — около 20% мозаицизма по WT CCR5. Таким образом, эффективность разработанной CRISPR-Cas9 системы для создания аллеля CCR5delta32 в эмбрионах человека довольно высока: более половины эмбрионов оказываются полностью модифицированными.

Ключевые слова: редактирование генома, CRISPR-Cas9, эмбрион человека, CCR5, CCR5delta32, устойчивость к ВИЧ

КОММЕНТАРИИ (0)