ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Получение рекомбинантного штамма Herpesvirus saimiri путем совместной культивации трансфицированной и пермиссивной клеточных культур

Информация об авторах

1 Московский физико-технический институт, Долгопрудный, Россия

2 Институт биоорганической химии имени академиков М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН, Москва

Для корреспонденции: Степан Петрович Чумаков
ул. Миклухо-Маклая, 16/10, г. Москва, 117997; moc.liamg@lukhtah

Информация о статье

Финансирование: работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (уникальный код проекта RFMEFI60418X0205).

Благодарности: авторы признательны Центру высокоточного редактирования и генетических технологий для биомедицины (Москва) за помощь в методах исследования.

Вклад авторов в работу: А. Хамад — работа с клеточными культурами, молекулярное клонирование; С. П. Чумаков — планирование исследования, работа с вирусными препаратами, трансфекция, титрование, анализ данных и подготовка рукописи.

Статья получена: 11.11.2019 Статья принята к печати: 25.11.2019 Опубликовано online: 12.12.2019
|

Рекомбинантные герпесвирусы можно применять в качестве терапевтических агентов-онколитиков, а также в качестве векторов большой емкости для доставки протяженных экспрессионных конструкций в клетки. Гамма-герпесвирус беличьих обезьян Herpesvirus saimiri обладает уникальной способностью инфицировать человеческие лимфоциты и вызывать их иммортализацию при сохранении зрелого фенотипа и функциональной активности. Проведение рекомбинации генома Herpesvirus saimiri в пермиссивной клеточной культуре затруднено из-за ее устойчивости к химической трансфекции и электропорации. Целью работы являлась разработка эффективного способа введения экспрессионных кассет в геном Herpesvirus saimiri без проведения трансфекции пермиссивной клеточной культуры. Для этого мы использовали совместную культивацию трансфицированных клеток HEK-293T, экспрессирующих также гликопротеины вакцинного штамма вируса кори, и инфицированных Herpesvirus saimiri пермиссивных клеток линии ОМК. Слияние клеток и образование синцитиев привели к запуску рекомбинации между вирусным геномом и экспрессионной кассетой, что позволило получить рекомбинантный вариант Herpesvirus saimiri без необходимости проведения химической трансфекции пермиссивных клеток. Трансгенный вариант вируса характеризовался стабильной экспрессией селективного маркера и сохранял способность персистировать в клеточной культуре в латентной форме, а также вызывать иммортализацию первичных лимфоидных клеток. Примененный метод позволяет в короткие сроки получать рекомбинантные варианты Herpesvirus saimiri с введенными в геном разнообразными экспрессионными кассетами.

Ключевые слова: ХАР, химерный антигенный рецептор, герпесвирус, вирусный вектор, рекомбинантный штамм

КОММЕНТАРИИ (0)