ISSN Print 2070–7320
ISSN Online 2070–7339
Вестник РГМУ
НАУЧНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ РНИМУ ИМЕНИ Н. И. ПИРОГОВА
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
Длинная некодирующая РНК NEAT1_1 снижает выживаемость первичных нейронных клеток при ЭПР-стрессе
Информация об авторах
1 Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н. И. Пирогова, Москва, Россия
2 Институт физиологически активных веществ Федерального исследовательского центра проблем химической физики и медицинской химии Российской академии наук, Черноголовка, Россия
3 Белгородский государственный национальный исследовательский университет, Белгород, Россия
Для корреспонденции: Михаил Сергеевич Кухарский
ул. Островитянова, д. 1, стр. 9, г. Москва, 117997, Россия; ur.umsr@myksrahkuk
Информация о статье
Финансирование: исследование выполнено при финансовой поддержке Российского Научного Фонда, проект № 22-25-00645.
Благодарности: авторы выражают благодарность Центру коллективного пользования ИФАВ РАН (FFSN-2021-0005 (2021–2023) за предоставленную возможность проведения экспериментов с использованием лабораторных животных.
Вклад авторов: Н. Е. Пукаева — проведение экспериментов на клеточных культурах, анализ клеточной гибели; В. Н. Залевская — работа с клеточными культурами; А. В. Дейкин — получение трансгенной линии мышей; М. И. Таубинская — работа с клеточными культурами, анализ морфологии нейронов, О. А. Кухарская — работа с клеточными культурами, анализ клеточной гибели; Р. К. Овчинников — анализ и интерпретация результатов, подготовка текста рукописи; А. И. Антохин — редактирование рукописи; М. С. Кухарский — планирование исследования, анализ и интерпретация данных, подготовка и редактирование статьи.
Соблюдение этических стандартов: исследование одобрено этическим комитетом ИФАВ ФГБУН ФИЦ ПХФ и МХ РАН (протокол № 53 от 18 декабря 2020 г.); работу с животными проводили в соответствии с «Правилами надлежащей лабораторной практики в Российской Федерации» от 2016 г.
Статья получена: 08.11.2023
Статья принята к печати: 16.12.2023
Опубликовано online: 31.12.2023
|
Рис. 1. Характеристика первичных культур гиппокампа, полученных от трансгенных мышей (NEAT1_1Tg) и мышей дикого типа (WT), по клеточному составу. А. Процентное содержание нейронов (NeuN), астроцитов (GFAP), микроглиоцитов (Iba1) и олигодендроцитов (Olig2) в первичных культурах. Б. Репрезентативные фотографии первичных культур, окрашенных на маркеры разных типов клеток. Ядра клеток окрашены DAPI. Масштабный отрезок — 100 мкм
Рис. 2. Морфофункциональная характеристика первичных нейронов. А. Репрезентативные фотографии нейронов дикого типа (WT) и трансгенных нейронов (NEAT1_1Tg). Иммуноцитохимическая окраска на белок Tau (показано красным), ассоциированный с микротрубочками, маркер нейронов NeuN (показано зеленым), ядра клеток окрашены DAPI. Масштабный отрезок — 50 мкм. Б. Анализ разветвленности отростков первичных нейронов (Sholl-анализ). На графике отражено среднее количество пересечений условных окружностей заданного радиуса с отростками. Множественный t-тест с поправкой Холма–Сидака
Рис. 3. Апоптотическая гибель в трансгенных (NEAT1_1Tg) первичных культурах и культурах дикого типа (WT). А. Апоптоз в культурах при обработке 200 мкМ MG132. Б. Апоптоз в культурах при обработке 10 мкМ MG132. Двухфакторный дисперсионный анализ, тест Фишера. * — p < 0,05; * * — p < 0,01. В. Репрезентативные фотографии клеточных культур при обработке 10 мкМ MG132 через 12 ч. Нейроны окрашены на маркер дифференцированных нейронов NeuN (показано зеленым), маркер апоптотической гибели клеток — активированная каспаза 3, CC3 (показано красным), ядра окрашены DAPI (показано синим). Масштабный отрезок — 100 мкм
Рис. 4. Апоптотическая гибель нейронов в трансгенных (NEAT1_1Tg) первичных культурах и культурах дикого типа (WT). А. Апоптоз при обработке культур 200 мкМ MG132. Б. Апоптоз при обработке культур 10 мкМ MG132. Двухфакторный дисперсионный анализ, тест Фишера. * * — p < 0,01; * * * — p < 0,001; * * * * — p < 0,0001
Рис. 5. Изменения экспрессии генов в трансгенных (NEAT1_1Tg) первичных культурах и культурах дикого типа (WT) при обработке 10 мкМ MG132. А–Г. Экспрессия генов, связанных с ЭПР-стрессом. Д–З. Экспрессия генов, связанных с апоптозом. Однофакторный дисперсионный анализ, тест Фишера. * — p < 0,05; * * — p < 0,01, * * * — p < 0,001; * * * * — p < 0,0001
Таблица. Последовательности праймеров для ОТ-кПЦР
